绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法的建立与优化

根据选择的靶基因RPO35基因序列,使用Oligo 7软件设计并筛选合适的引物与探针,在37℃下通过反应时间和反应体系的优化,结合胶体金试纸条检测,建立了一种检测绵羊痘病毒/山羊痘病毒的重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)方法,对其敏感性和重复性进行了检验,并将其用于临床样品的检测,将检测结果与普通PCR检测结果进行了比较.试验结果显示,病毒核酸阳性样品能够在试纸条上显示出阳性条带,阴性样品不显示,试验具有良好的重复性、敏感性(达到620fg/μL),与普通PCR方法相当.使用本方法,对PCR方法确定的绵羊痘病毒核酸阳性的5份样品和随机抽取的5份临床样品进行了检测,结果显示,绵羊痘病毒核酸阳性的5份样品全部为阳性;5份临床样品中1份为阳性,4份为阴性,检测结果与普通PCR检测结果完全(100％)符合.上述结果表明,本研究建立的RPA技术适用于绵羊痘病毒/山羊痘病毒的快速检测,为绵羊痘和山羊痘的临床诊断提供了新的选择.