病毒性神经坏死病毒实时荧光RT-RAA快速检测方法的建立

为建立一种简单、快速检测病毒性神经坏死病毒(VNNV)的重组酶介导等温扩增(RAA)方法,本研究通过比较分析VNNVRNA2基因保守序列,设计引物与探针.经过筛选优化,建立了VNNV实时荧光RT-RAA快速检测方法.结果显示,该方法在39℃恒温反应15 min即可快速、特异性地检测出VNNV,并与常见的鱼类RNA病毒核酸不发生交叉反应,其对标准质粒的检测下限为2.6×101 copies/μL,组内和组间变异系数均小于5％.利用该方法对48份实验室及送检样品进行检测,结果与实时荧光RT-PCR的一致.上述结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,特异性强,敏感性高,结果可靠,且不依赖于复杂的仪器,可适用于现场和实验室对VNNV的快速检测.