广藿香JAR1基因的克隆及原核表达

目的 研究JA信号传导途径对广藿香萜类生物合成的调控作用,从广藿叶片中克隆广藿香JAR1基因.方法 根据广藿香转录组PcJAR1基因序列,设计特异性引物,从广藿香叶片中克隆出PcJAR1基因,进行生物信息学分析,同时构建pET-28a-PcJAR1、pET-32b-PcJAR1原核表达载体,并对异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达的条件进行考察.结果 表明该序列全长1725 bp,编码574个氨基酸,预测分子量为64.15 KD,等电点为5.69,主要定位在细胞核,对结构域的预测中发现PcJAR1氨基酸序列中含有GH3保守区域,可能与茉莉酸(JA)和生长素(Indole-3-ace-tic acid,IAA)的合成有关.利用无缝克隆技术构建pET-28a-PcJAR1、pET-32b-PcJAR1原核表达载体并导入BL21(DE3)表达菌中,考察不同浓度IPTG诱导对PcJAR1蛋白表达量的影响.结果 表明PcJAR1融合蛋白主要以包涵体的形式在沉淀中表达.结论 该研究成功克隆广藿香PcJAR1基因,初步探讨PcJAR1编码蛋白的诱导条件,为进一步研究广藿香PcJAR1蛋白的结构和功能奠定基础.