下调LANA对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒复制的影响

本文旨在探讨下调潜伏相关核抗原(Latency-associated nuclear antigen,LANA)对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma associated herpesvirus,KSHV)复制的影响.以四环素(Doxycycline,DOX)处理 KSHV 阳性的iSLK.219细胞,在不同时间点收集细胞,采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,qPCR)检测裂解复制期LANA mRNA表达水平.采用脂质体法转染si-LANA至iSLK.219细胞中下调LANA表达水平,以转染非特异siRNA为对照,24h后加入DOX激活病毒裂解复制,在裂解复制激活后不同时间点收集细胞和培养液上清.采用台盼蓝染色法检测细胞活力,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescence protein,RFP)表达评价KSHV裂解复制水平;qPCR检测细胞内和上清液中KSHV基因组的拷贝数以判断病毒复制水平.诱导KSHV裂解复制后24h和48h LANA表达分别为潜伏期的2.2和2.6倍.敲低LANA后iSLK.219细胞裂解复制水平在24h、48h和72h比未敲低组分别下降了 8.18、3.25和3.98倍.敲低LANA细胞内病毒基因组拷贝数没有明显增加,而未敲低组在细胞内病毒基因组拷贝数在72h增加到2.1倍.相较于未敲低组,上清液中的病毒拷贝数在所有时间点均显著减少.对细胞活力的分析显示敲低LANA降低了细胞活力.敲低LANA抑制KSHV裂解复制,LANA可能通过维持细胞存活和增加细胞内病毒基因组拷贝数促进KSHV病毒的裂解复制.