毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的:探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130(GP130)/Janus酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响.方法:原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞,并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行鉴定.分别加入5、10、20μmol·L-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h,然后加入100μmol·L-1过氧化氢(H202)处理24 h造成氧化损伤模型,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度.实验分为空白组、模型组(H202100μmol·L-1)、毛蕊异黄酮组(毛蕊异黄酮20 μmol·L-1)、毛蕊异黄酮+LY294002组(毛蕊异黄酮 20 μmol·L-1+LY294002 10μmol·L-1)、毛蕊异黄酮+Stattic组(毛蕊异黄酮 20 μmol·L-1+Stattic 3 μmol·L-1)o CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B(Akt)、GP130、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白表达水平.结果:与空白组比较,模型组细胞的增殖活力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);与模型组比较,毛蕊异黄酮(20 μmol·L-1)组细胞的增殖活力明显增加,细胞凋亡率明显降低(P＜0.05);与毛蕊异黄酮(20μmol·L-1)组比较,PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力,增加细胞凋亡率(P＜0.05).与空白组比较,模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加(P＜0.05);与模型组比较,各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论:毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡,并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用.