水稻苗期致死突变体的鉴定及其基因定位

肽链释放因子RF1通过识别终止密码子在翻译终止过程中起重要调控作用。获得水稻苗期致死突变体，明确OseRF1-1表达模式，为进一步研究OseRF1-1功能奠定基础。以粳稻花之舞和T-DNA插入突变体为材料，利用Tail-PCR、石蜡切片技术、Southern杂交和Northern杂交技术鉴定一个肽链释放因子eRF1-1的T-DNA单拷贝插入突变体ls。采用DNAMAN6.0软件和SMART对OseRF1-1进行生物信息学分析，利用RT-qPCR方法分析OseRF1-1的组织特异性表达。通过PEG介导方法转化拟南芥，明确OseRF1-1的亚细胞定位。结果显示，ls突变体植株在3-5叶分蘖期迅速死亡；ls突变体叶鞘与分蘖节连接区域褐化，分蘖节越往下部位症状较严重；Tail-PCR分析结果显示，ls突变体T-DNA插入时丢失了T-DNA的右边界和NOS的终止子序列导致GUS和OseRF1-1融合转录，而GUS的终止密码子仍然存在，进而引起OseRF1-1不能进行正常翻译；ls突变体转录出GUS和OseRF1-1的融合转录子；OseRF1-1在各组织中均检测到表达且在穗中高表达；该基因定位于细胞核和细胞质。ls突变体导致水稻苗期致死可能是由于T-DNA插入OseRF1-1导致该基因不能正常转录引起。