瑞德西韦在体外抑制猪流行性腹泻病毒复制的研究

为探究核苷类药物瑞德西韦(Remdesivir)对猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制的影响,本研究先将不同浓度(1 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L、200μmol/L)的瑞德西韦加入 Vero E6 细胞中,通过测定OD450nm值计算细胞存活率,评估瑞德西韦对VeroE6细胞的毒性.结果显示,低于20 μmol/L的瑞德西韦对细胞几乎无毒性.分别将不同浓度(1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L)的瑞德西韦与PEDV(MOI 0.1)混匀后加入Vero E6细胞,24 h后通过间接免疫荧光实验(IFA)、荧光定量PCR、western blot、取细胞上清测定TCID50检测瑞德西韦对PEDV复制的影响.结果显示,瑞德西韦能够抑制PEDV的复制,瑞德西韦的浓度越高,抑制效果越好,16μmol/L的瑞德西韦能够完全抑制PEDV的复制.计算得出瑞德西韦的半数有效浓度(EC50)为11.97 μmol/L.将11.97 μmol/L的瑞德西韦与PEDV(MOI 0.1)混匀后加入Vero E6细胞,分别在4h、12h、20 h、24 h固定细胞,通过IFA、荧光定量PCR、western blot检测瑞德西韦对PEDV复制的影响.结果显示,瑞德西韦在各个时间点均能够抑制PEDV的复制,整个实验过程中均保持良好的抑制效果.将16μmol/L的瑞德西韦与PEDV(MOI0.1)以不同给药方式接种VeroE6细胞,24h后通过IFA、western blot、TCID50检测瑞德西韦的最佳给药方式.结果显示,最佳的给药方式为治疗性给药即接种PEDV后给药.上述结果表明瑞德西韦可以在体外抑制PEDV的感染,本研究探究了瑞德西韦在Vero E6细胞中对PEDV基因组复制及蛋白表达的影响,为临床治疗PEDV感染提供新的参考依据.