旋毛虫HSP70蛋白诱导大鼠心肌细胞线粒体凋亡机制的研究

为了解旋毛虫HSP70致心肌损伤的机制,本研究将不同浓度旋毛虫重组HSP70蛋白(Ts-Hsp70)与大鼠心肌细胞H9c2共孵育后,采用CCK-8试剂盒筛选Ts-Hsp70作用H9c2细胞的最适浓度.以最适浓度Ts-Hsp70与H9c2细胞共孵育不同时间后,采用微孔板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,采用比色法检测细胞培养上清液中心肌细胞损伤标志物肌酸激酶(CK)的含量,采用免疫荧光检测Ts-Hsp70作用后H9c2.细胞活性氧(ROS)的释放,采用qPCR和western blot方法检测Ts-Hsp70作用后的H9c2细胞线粒体凋亡与抗凋亡途径中的Bax、Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome C与Bcl-2的基因转录水平与蛋白表达水平.结果显示,经最适浓度为60 μg/mL的Ts-Hsp70分别刺激H9c2细胞6h、12h和18h后,随着Ts-Hsp70对H9c2细胞作用时间的延长,LDH、CK、ROS含量与Bax、Cytochrome C及激活状态下的Caspase-3、Caspase-9基因转录水平与蛋白表达水均升高,且均于作用12h时达峰值,显著高于对照组(P＜0.01),而线粒体抗凋亡基因Bcl-2基因转录水平与蛋白表达水平随着Ts-Hsp70对H9c2细胞作用时间的延长均逐渐降低,且均于作用12h时达谷值,显著低于对照组(P＜0.01).本研究首次证实Ts-Hsp70可增加细胞中LDH、CK、ROS的含量,激活并调节H9c2细胞中的线粒体凋亡通路,该研究结果为进一步研究旋毛虫致心肌损伤机制提供了基础数据.