4种致泻大肠埃希氏菌数字PCR检测方法的建立

针对常见致泻大肠埃希氏菌特征基因stx2、escV、lt、pic,研究建立了一套微滴数字PCR(ddPCR)方法.优化了引物探针浓度,退火温度等条件,考察了方法特异性、线性范围、精密度.结果表明,特征基因stx2在2.0～24506.67个拷贝,escV在8.8～24756.67个拷贝,lt在1.63～19990.00个拷贝,pic在1.63～26500.00个拷贝均呈线性关系,线性系数均大于0.99;确定了各基因的定量限(stx2、escV、lt、pic分别为21个拷贝、20.60个拷贝、21.67个拷贝、27.67个拷贝);方法精密度小于10％,特异性良好.采用该方法对实际样品进行检测,结果显示,加标样品显示有阳性微滴,而其余样品均未检出阳性微滴,表明建立的数字PCR方法可用于食品中致泻大肠埃希氏菌的检测.该方法可为监管部门对生产牛肉制品、即食生肉制品、生食果蔬制品等重点企业生产环境卫生的检查提供技术支撑,有利于提高我国食品生产中原料、环境及加工过程的卫生水平,防止微生物污染和交叉污染,为食品生产全链条进行食品安全风险防范提供有力保障.