敲除泛素特异性蛋白酶13促进TNF⁃α诱导的肝实质细胞凋亡

目的 探究敲除泛素特异性蛋白酶13(USP13)对肿瘤坏死因子α(TNF?α)诱导下小鼠肝实质细胞凋亡的影响.方法 体外分离培养小鼠原代肝实质细胞,随后用TNF?α或TNF?α和环己酰亚胺(CHX)共刺激细胞.MTS法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡、实时荧光定量PCR(qRT?PCR)检测凋亡相关基因表达、胱天蛋白酶?3(caspase?3)凋亡试剂盒检测caspase?3的激活、Western印迹法检测核因子κB(NF?κB)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路活化.结果 敲除USP13的小鼠肝实质细胞在TNF?α和CHX共诱导下,细胞活力下降、凋亡增多.机制探究发现,在TNF?α和CHX共处理下,敲除USP13导致抗凋亡基因下调、促凋亡基因上调,以及caspase?3活化增强.在TNF?α单独处理下,敲除USP13导致NF?κB及MAPK信号通路活化受阻.结论 敲除USP13抑制肝实质细胞中NF?κB及MAPK信号通路活化,促进TNF?α诱导的细胞凋亡.