舒肝和络醒脾方对肝纤维化模型大鼠肝组织Wnt/β-Catenin信号通路的影响

目的 观察舒肝和络醒脾方对CCl4 诱导的肝纤维化模型大鼠的治疗作用,并基于Wnt/β-Catenin信号通路探讨其作用机制.方法 将60只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组,模型组,阳性对照组,舒肝和络醒脾方高、中、低剂量组,每组10只,模型和用药大鼠给予腹腔注射40%CCl4 油溶液诱导肝纤维化模型.空白对照组和模型组给予10 mL/kg生理盐水灌胃,阳性对照组用水飞蓟宾葡甲胺溶液50 mg/kg灌胃,舒肝和络醒脾方高、中、低剂量组分别按12.42 g/kg、6.21 g/kg和3.11 g/kg(生药/体质量)灌胃,每日1次,持续8周.给药8周后处死,期间动态监测各组大鼠的生理状况.处死后取血清于碱水解比色法检测羟脯氨酸,于全自动生化分析仪检测AST、ALT、总蛋白和Alb水平;HE染色及Masson染色观察肝脏的病理学形态改变;RT-qPCR法、Western Blot法检测Wnt1、β-Catenin和Cyclin D1的 mRNA和蛋白水平的表达.计量资料多组间比较采用one-way ANOVA分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 与模型组比较,飞蓟宾葡甲胺溶液和舒肝和络醒脾方用药干预后的大鼠生理状况改善明显;血液学指标方面,与模型组比较,阳性对照组和舒肝和络醒脾方干预后大鼠血清中HYP、ALT、AST和Glo水平显著降低(P值均＜0.05),总蛋白、Alb和A/G水平明显升高(P值均＜0.05);与阳性对照组比较,舒肝和络醒脾方低剂量组的ALT、AST水平显著升高(P值均＜0.05),总蛋白、Alb和A/G水平明显降低(P值均＜0.05);肝组织学方面,HE染色显示阳性对照组可见门静脉轻度纤维化伴少量纤维间隔,肝细胞轻微脂肪变;舒肝和络醒脾方低剂量组可见明显门静脉纤维化伴少量纤维间隔;舒肝和络醒脾方中剂量组可见少量门静脉轻微纤维化;舒肝和络醒脾方高剂量组未观察到明显异常.Masson染色显示,舒肝和洛醒脾方高剂量组在胶原沉积的治疗效果方面优于水飞蓟宾葡甲胺组和舒肝和络醒脾方中、低剂量组(P值均＜0.05),与舒肝和络醒脾方高剂量组基本等效.水飞蓟宾葡甲胺和舒肝和络醒脾方高、中剂量干预对Wnt1、β-Catenin和Cyclin D1的mRNA水平和蛋白表达的抑制作用更明显(P值均＜0.05).结论 舒肝和络醒脾方能够发挥稳定的抗肝纤维化作用,高剂量作用效果较为显著,调节Wnt/β-Catenin信号通路可能为其抗肝纤维化的信号途径之一.