田鼠巴贝虫丽水分离株小鼠感染模型的建立及其病理变化

目的 建立田鼠巴贝虫丽水分离株(分离自浙江丽水患者,简称丽水分离株)BALB/c小鼠感染模型,研究小鼠感染后的原虫血症动态变化和病理特征.方法 用浙江丽水田鼠巴贝虫病患者的全血血样腹腔接种NOD-SCID小鼠进行保种、分离田鼠巴贝虫.50只BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组(每组25只),感染组每鼠腹腔接种1.0×107个NOD-SCID小鼠田鼠巴贝虫感染红细胞,对照组小鼠接种等量生理盐水.每日采小鼠尾静脉血制备薄血膜片,吉氏染色后显微镜下观察原虫形态,分析原虫血症.用DNA提取试剂盒提取感染小鼠血样DNA,巢式PCR扩增巴贝虫18SrRNA基因,测序后进行基因型鉴定和系统进化树分析.感染后0、5、10、15和20d,每组分别取5只小鼠,测量体质量、脾长度和质量,制备脾组织切片,HE染色显微镜下观察脾组织病理特征;采用动物全自动血液分析仪检测感染小鼠血常规.组间比较采用t检验.结果 感染后5 d,感染组小鼠血涂片中可见单个环状体;感染后10d,同一红细胞中可见2个或4个虫体,呈双梨形或马耳他十字形,并有细胞溶血现象;感染后15和20 d,红细胞内虫体仍以环状体为主.感染后10d,感染组小鼠的原虫血症达到峰值,为(39.1±4.6)％;感染后20 d,原虫血症降至1％以下.田鼠巴贝虫丽水分离株18S rRNA基因序列与田鼠巴贝虫(GenBank登录号MT423326)的一致性为98％,在系统进化树上聚在同一分支上.感染后10、15和20 d,感染组小鼠体质量分别为(20.60±1.02)、(22.04±0.77)和(22.78±0.64)g,均低于对照组[(23.94±0.84)、(24.50±0.26)和(24.64±0.54)g](t=5.64、6.78 和 4.99,P＜0.01).感染后 5、10、15和 20d,感染组小鼠脾质量分别为(0.33±0.02)、(0.98±0.11)、(0.93±0.04)和(0.67±0.05)g,均高于对照组[(0.11±0.01)、(0.12±0.01)、(0.10±0.02)和(0.11±0.01)g](t=21.82、22.25、35.62 和 10.47,P＜0.01);脾长度分别为(2.40±0.12)、(3.16±0.06)、(3.22±0.05)和(2.98±0.08)cm,均高于对照组小鼠[(1.76±0.09)、(1.74±0.09)、(1.74±0.15)和(1.80±0.07)cm](t=9.44、30.27、20.93 和 24.09,P＜0.01).感染后10d,感染组小鼠脾明显肿大,组织结构紊乱,白髓和红髓交界的边缘区模糊,脾窦充血,淋巴细胞大量浸润;感染后20d,脾组织实质结构恢复,红髓、白髓分布清晰.血常规结果显示,感染后10d,感染组小鼠红细胞计数、红细胞压积、血红蛋白浓度、平均血细胞体积、红细胞分布宽度标准差、红细胞分布宽度变异系数、平均血红蛋白含量和平均血红蛋白浓度分别为(4.45±0.32)×1012/L、(27.72±2.03)％、(86.2±6.0)g/L、(60.7±1.4)fL、(84.1±4.0)fL、(31.9±1.3)％、(19.4±0.4)pg 和(320.4±3.8)g/L,与对照组[(9.55±0.16)×1012/L、(47.94±1.64)％、(163.0±4.8)g/L、(48.2±1.1)fL、(27.7±1.3)fL、(13.5±0.5)％、(16.7±0.7)pg 和(339.0±3.9)g/L]相比,差异有统计学意义(t=32.24、17.34、22.23、15.71、30.33、28.41、7.43和7.61,P＜0.01);感染后10d,感染组小鼠白细胞计数、单核细胞计数和百分比、中性粒细胞计数和百分比分别为(6.76±0.87)×109/L、(0.78±0.20)×109/L、(9.90±0.87)％、(1.92±0.42)×109/L 和(27.74±2.67)％,与对照组[(3.85±0.26)×109/L、(0.17±0.05)×109/L、(3.28±0.40)％、(0.78±0.15)×109/L 和(21.20±1.18)％]相比,差异有统计学意义(t=7.12、6.54、15.54、5.71 和 5.00,P＜0.01).结论 建立了从人体分离的田鼠巴贝虫丽水分离株小鼠感染模型,小鼠感染后体质量显著减轻、脾肿大、脾组织结构紊乱、贫血严重.