MYCN通过抑制NK细胞介导神经母细胞瘤细胞免疫逃逸机制研究

目的:探讨MYCN对NK细胞的调控作用及其介导神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞免疫逃逸机制。方法:采用荧光原位杂交法（FISH）法和免疫组织化学法检测NB组织MYCN的表达情况，流式细胞术检测外周血NK细胞数量及比例、NK细胞的活化、NK细胞表面活化受体和NB细胞表面相应配体的表达状况；干扰/过表达NB细胞系MYCN，与分选的健康儿童NK细胞进行共培养，ELISA法检测共培养上清中细胞因子的分泌状况，4 h乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测NK细胞对NB细胞的杀伤性。结果:MYCN高表达NB患儿外周血NK细胞数量（ F = 45. 53， P = 0. 0002）及比例（ F = 43. 93， P = 0. 0003）显著减少，MYCN可显著抑制γ-干扰素、颗粒酶B和穿孔素的释放[SK-N-BE （2）： t = 9. 10， P = 0. 0008； t = 4. 76， P = 0. 0089； t = 4. 66， P = 0. 0096；SH-SY-5Y： t = 16. 79， P < 0. 0001； t = 35. 85， P < 0. 0001； t = 24. 66， P < 0. 0001]，抑制NK细胞的活化和对靶细胞的杀伤作用[SK-N-BE（2）： t = 7. 25， P = 0. 0019；SH-SY-5Y： t = 33. 07， P < 0. 0001]，MYCN高表达促进NK细胞NKG2A的表达[SK-N-BE（2）： t = 9. 25， P = 0. 0008；SH-SY-5Y： t = 14. 65， P = 0. 0001]，抑制NKG2D的表达[SK-N-BE（2）： t = 7. 21， P = 0. 0020；SH-SY-5Y： t = 8. 66， P = 0. 0010]，同时抑制NB细胞中NKG2D配体MICA[SK-N-BE（2）： t = 18. 35， P < 0. 0001；SH-SY-5Y： t = 56. 90， P < 0. 0001]和MICB[SK-N-BE（2）： t = 22. 40， P < 0. 0001]的表达。 结论:NB中高表达的MYCN可通过抑制NK细胞的数量及活性从而抑制NK细胞对NB细胞的杀伤介导NB细胞免疫逃逸。