乳蛋白高效液相色谱检测方法的优化及甘南牦牛乳指纹图谱的建立

建立多种乳蛋白同时检测的高效液相色谱法，为乳及乳制品乳蛋白的分离检测提供方法，并建立甘南牦牛乳的指纹图谱。样品采用含Bis-Tris、盐酸胍、柠檬酸钠、二硫苏糖醇等的缓冲液使蛋白溶解变性，采用高效液相色谱二极管检测器检测，选择ZORBAX 300SB-C8色谱柱（4.6 mm×150 mm，3.5 μm），检测波长为215 nm，柱温40 ℃，流速0.6 mL/min，进样量10 μL，流动相为0.1%三氟乙酸水溶液-0.1%三氟乙酸乙腈进行梯度洗脱。应用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对甘南牦牛乳进行相似度分析。所建方法能够分离乳中的κ-酪蛋白（κ-CN1、κ-CN2、κ-CN3）、α-酪蛋白（αs2-CN、αs1-CN）、β-酪蛋白（β-CN B型、β-CN A1型、β-CN A2型）、α-乳白蛋白、β-乳清蛋白（β-Lg B、β-Lg A），重复性、精密度结果为峰保留时间RSD＜1.3%，峰面积RSD＜3.3%。10批甘南牦牛乳样品得到的指纹图谱相似度大于0.99，有12个共有峰，指认了其中9个乳蛋白色谱峰。该方法操作简便、具有良好的重现性和专属性，适用于乳及乳制品中多种乳蛋白的分离检测。所建立的甘南牦牛乳指纹图谱为牦牛乳的质量控制提供参考依据。