C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6破坏大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的机制研究

目的 探讨C1q肿瘤坏死因子相关蛋白6（C1q and tumor necrosis factor related protein 6,C1QTNF6）对大鼠大脑中动脉缺血再灌注（middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R）后血脑屏障及内皮细胞闭合蛋白（occludin）和闭锁小带蛋白-1（zonula occludens 1,ZO-1）表达的影响。方法 将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、MCAO/R组、shRNA-C1QTNF6组，造模前两组大鼠通过尾静脉注射生理盐水，shRNA-C1QTNF6组大鼠注射慢病毒载体进而沉默C1QTNF6的信使RNA（messenger RNA,mRNA）水平，注射3 d后各组用改良线栓法建立大鼠MCAO/R模型，缺血2 h，再灌注24 h。于造模后和再灌注24 h采用改良神经功能缺损评分（modified neurological severity score,m NSS）法评价各组神经行为功能，TTC染色比较脑梗死体积比值，蛋白质印迹法（western blot,WB）检测梗死区顶叶半暗带脑组织蛋白C1QTNF6、IL-1β、occludin、ZO-1的表达水平，尼氏染色和苏木精-伊红染色观察梗死区顶叶半暗带病理损伤变化，荧光Tunel/Neun双染法计数梗死区顶叶半暗带神经元凋亡。结果 shRNA-C1QTNF6组造模后（10.1±0.6分vs.10.7±1.0分，P=0.0003）与再灌注24 h（7.2±0.4分vs.7.9±0.8分，P=0.0001）m NSS均低于MCAO/R组，脑梗死体积比值（26.32%±5.71%vs.40.56%±7.74%,P=0.0004）低于MCAO/R组。WB检测结果显示，造模后MCAO/R组脑组织（0.66±0.06 vs.0.43±0.05,P=0.0229）C1QTNF6表达高于假手术组；shRNA-C1QTNF6组脑组织C1QTNF6表达均低于假手术组（0.15±0.03 vs.0.43±0.05,P=0.0067）和MCAO/R组（0.15±0.03vs.0.66±0.06,P=0.0001）。MCAO/R组和shRNA-C1QTNF6组IL-1β表达（0.76±0.07 vs.0.18±0.04,P=0.0001;0.47±0.07 vs.0.18±0.04,P=0.0118）均高于假手术组，shRNA-C1QTNF6组IL-1β表达（0.47±0.07 vs.0.76±0.07,P=0.0123）低于MCAO/R组。MCAO/R组和shRNA-C1QTNF6组occludin表达（0.47±0.03 vs.1.07±0.06,P=0.0001;0.84±0.05 vs.1.07±0.06,P=0.0124）和ZO-1表达（0.19±0.02 vs.0.76±0.03,P=0.0001;0.58±0.04 vs.0.76±0.03,P=0.0038）均低于假手术组，shRNA-C1QTNF6组occludin表达（0.84±0.05 vs.0.47±0.03,P=0.0003）和ZO-1表达（0.58±0.04vs.0.19±0.02,P=0.0001）均高于MCAO/R组。尼氏染色显示，shRNA-C1QTNF6组缺血区尼氏小体数量（361.4±18.3个vs.181.6±21.5个，P=0.0001）较MCAO/R组增多，神经元损伤程度更轻。苏木精-伊红染色显示，shRNA-C1QTNF6组缺血半暗带顶叶皮层病理损伤程度较MCAO/R组有所改善。Tunel/Neun双染法显示shRNA-C1QTNF6组（19.67±0.88个vs.45.00±2.89个，P=0.0002）Tunel/Neun双阳性细胞数量比MCAO/R组减少，沉默C1QTNF6表达可减少神经元凋亡。结论 抑制大鼠C1QTNF6表达可能通过下调IL-1β的表达，促进内皮细胞紧密连接蛋白occludin和ZO-1表达上升，减轻脑血管内皮紧密连接蛋白损伤，发挥对脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用。