天花粉蛋白通过影响Foxp3的泛素化水平增强CD4 + Treg的体外诱导的初步研究

为研究中药天花粉蛋白（trichosanthin, Tk）能否在体外条件下促进CD4 + Treg定向诱导分化及其效率，并初步探讨Tk的负向免疫调节作用与Foxp3分子泛素化水平调控的可能机制，建立经典Treg诱导体系，即分离小鼠脾脏淋巴细胞并加入抗CD3和抗CD28抗体以及IL-2、TGF-β,共同诱导Treg。接着，向培养体系中加入Tk（1.5μg/mL）连续培养3 d, FACS检测发现加入Tk后Treg百分比显著上升（P＜0.05）;Treg特异性转录因子叉状头转录因子3（forkhead box protein3,Foxp3）的蛋白表达水平显著上升（P＜0.05）;Real-Time PCR检测显示其mRNA水平降低显著（P＜0.05）。进一步的研究建立过表达Foxp3的HEK293T细胞系，Western blotting检测结果显示，Tk可延长Foxp3蛋白的半衰期（P＜0.05）,并降低其泛素化水平。以上结果提示，Tk具有负向免疫调节作用，并能提高Treg的百分比及抑制Foxp3蛋白的泛素化，起到稳定Foxp3分子的作用。