抗PCV4 Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立可应用于猪圆环病毒4型（PCV4）候选疫苗特异性抗体检测与评价方法，本研究应用PCV4 Cap蛋白作为抗原，以PCV4多克隆兔源抗体作为一抗，优化各反应的最佳条件并建立了针对PCV4 Cap蛋白抗体的间接ELISA方法。最佳条件为2 μg/mL PCV4 Cap纯化蛋白，4℃过夜包被酶标板，5%脱脂乳，封闭60 min，待检血清稀释比例为1:800，反应条件为37℃，45 min，酶标抗体稀释比例为1:5 000，反应条件为37℃，60 min，底物显色时间为10 min，大于0.157即可判定为阳性，灵敏度可达104 800倍。成功建立的抗PCV4 Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性、重复性和特异性。可为检测PCV4候选疫苗的特异性抗体水平提供一种精准、高效的方法。