牛病毒性腹泻病毒TaqMan探针荧光RT-PCR方法的建立和临床应用

为建立一种牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的快速检测方法，本研究根据国内BVDV流行毒株5’-UTR序列保守区域设计1对特异性引物和TaqMan探针，并优化了反应条件，最终建立了一种检测BVDV基因1型（BVDV1）的TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法，并开展7省份BVDV1型检测和流行情况分析。结果显示：所建立方法能够特异性检测出BVDV1，与基因2型BVDV、猪瘟病毒、边界病毒、牛冠状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒等病原无交叉反应；灵敏度高，最低检测下限为4.3拷贝数/μL；批内和批间变异系数均小于2%，重复性良好。7省份规模化牛养殖场BVDV1型平均阳性率为17.40%（161/925），序列分析表明我国主要流行的为BVDV1a，BVDV1c亚型。本研究成功建立了一种良好的诊断BVDV的方法，监测地区优势流行毒株为BVDV1 1a与1c亚型，为临床中BVDV早期诊断和流行病学调查监测提供了技术和数据支持。