miR-20b在寻常型银屑病患者血浆中的表达及其对角质形成细胞的影响

目的:探究微小RNA-20b(miR-20b)在寻常型银屑病患者外周血血浆中的表达，并进一步分析其对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞株)增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:收集36例寻常型银屑病患者外周血和36例健康志愿者外周血(健康对照组)，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血浆中miR-20b的相对表达水平。体外培养HaCaT细胞，随机分为对照组(不予处理)、白介素-22(IL-22)治疗组(采用100 ng/ml IL-22刺激24 h)、IL-22+抑制剂对照组(转染抑制剂阴性对照后，用100 ng/ml IL-22刺激24 h)和IL-22+miR-20b抑制剂组(转染miR-20b抑制剂后，用100 ng/ml IL-22刺激24 h)。采用qRT-PCR检测各组HaCaT细胞中miR-20b的相对表达；CCK-8法和流式细胞术分别检测HaCaT细胞增殖和凋亡。采用生物信息软件预测miR-20b的下游靶点。双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b与killin-p53调节DNA复制抑制剂(KLLN)3′UTR的靶向结合关系。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测KLLN蛋白在各组HaCaT细胞中的表达水平。结果:银屑病患者血浆中miR-20b水平显著高于健康对照组[(1.62±0.53) vs (1.00±0.42)]，差异有统计学意义( P<0.001)。qRT-PCR结果显示，miR-20b在IL-22治疗组中表达高于对照组( P<0.05)；miR-20b在IL-22+miR-20b抑制剂组中表达低于IL-22+抑制剂对照组( P<0.05)。CCK-8结果显示，IL-22治疗组的HaCaT细胞的吸光度值在24、48、72 h和96 h时显著高于对照组(均 P<0.05)；IL-22+miR-20b抑制剂组的HaCaT细胞在48、72、96 h时的吸光度值显著低于IL-22+抑制剂对照组(均 P<0.05)。IL-22治疗组细胞的凋亡率显著低于对照组[(4.12±0.37)% vs (7.06±0.58)%]，差异有统计学意义( P<0.05)。IL-22+miR-20b抑制剂组HaCaT细胞的凋亡率显著高于IL-22+抑制剂对照组[(6.59±0.53)% vs (3.94±0.46)%]，差异有统计学意义( P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b与KLLN的相互作用，结果显示KLLN野生型的荧光素酶活性被miR-20b模拟物显著抑制。Western blot结果显示，IL-22治疗组中KLLN的蛋白表达低于对照组( P<0.05)；IL-22+miR-20b抑制剂组的KLLN的蛋白表达高于IL-22+抑制剂对照组( P<0.05)。 结论:miR-20b在寻常型银屑病患者血浆中高表达，miR-20b可能通过靶向KLLN促进角质形成细胞的增殖和抗凋亡能力。