斑马鱼肝脏组织油红O染色方法比较优化

目的 通过设置不同染色步骤、条件,探索适合处理斑马鱼肝脏的冷冻切片油红O染色方法.方法 取3月龄斑马鱼肝脏OCT样品,设置6、8、10、12 μm四种不同厚度切片各两片,其他各组切片厚度均为8 μm,采用不同的处理方法处理两张切片.染色后置于显微镜下观察视野内组织完整度、背景情况、橘红色脂滴的染色面积、位置以及深染的细胞和位置形态.结果 以4％多聚甲醛固定、10％～30％蔗糖梯度脱水,切片厚度设置8～10 μm,室温晾干1 h,甲醛(4％)固定10 min,油红O染色10 min,60％异丙醇分化2 s,ddH2O浸洗浸泡5 s后,苏木素染色3 min,ddH2O浸泡30 s去浮色,1％盐酸酒精分化2 s,流水冲洗2 min返蓝,甘油明胶封片为条件进行油红O染色的效果较好,斑马鱼肝组织组织完整、背景清晰,脂滴染色效果较好.结论 优化的斑马鱼油红O染色方法可以较为清晰地显示肝脏脂滴,可辨别细胞核轮廓位置,进而对斑马鱼肝病模型中的脂肪变性情况进行定位与半定量的分析.