miR-126-5p靶向抑制ERCC1增加结肠癌细胞对奥沙利铂化疗的敏感性

目的 探讨miR-126-5p通过靶向抑制切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complement 1,ERCC1)促进结肠癌细胞对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)的敏感性及其分子机制.方法 利用L-OHP浓度梯度递增法处理结肠癌细胞HCT116,建立耐L-OHP的人结肠癌细胞株HCT116/L-OHP.CCK-8法检测并计算L-OHP作用后的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值.qRT-PCR法检测miR-126-5p和ERCC1在HCT116和HCT116/L-OHP细胞株中的表达.利用Lipofectamine?2000转染miR-126-5p mimics(miR-126-5p mimics组)和miR-NC质粒(miR-NC组)后,CCK-8法检测HCT116/L-OHP细胞对L-OHP的敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率.利用双荧光素酶报告实验验证miR-126-5p和ERCC1的相互作用机制.Western blot法观察miR-126-5p mimics转染后ERCC1蛋白的表达变化.结果 与HCT116细胞比较,HCT116/L-OHP细胞miR-126-5p表达水平下调(P<0.05).不同浓度L-OHP(0、50、100、150和200μg/mL)处理48 h后,miR-126-5p mimics组细胞IC50值低于miR-NC组和HCT116/L-OHP未转染组,miR-126-5p mimics的转染降低了HCT116/L-OHP细胞的增殖活性(均P<0.05).转染48 h后,miR-126-5p mimics组较miR-NC组ERCC1蛋白表达下降(P<0.05).双荧光素酶靶标实验表明,ERCC1是miR-126-5p的直接作用靶点.结论 上调miR-126-5p表达可逆转HCT116/L-OHP细胞株对L-OHP的耐药性,其作用机制可能与负性调控ERCC1表达有关.