Hsa_circ_0016600/miR?1298/TGFA轴促进人肺腺癌细胞增殖和迁移的作用机制

目的 目前对于Hsa_circ_0016600是否通过miR?1298/TGFA轴通路参与肺腺癌的发生过程尚不清楚.文中旨在探讨Hsa_circ_0016600对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其对miR?1298/TGFA通路的调控作用. 方法 通过高通量测序技术对5对肺癌组织及癌旁组织进行检测,筛选出具差异性的环状RNA Hsa_circ_0016600,利用mirTarbase和Tar?getScan数据库预测、荧光素报告酶实验验证Hsa_circ_0016600与miR?1298、miR?1298与TGFA的相互作用;利用qRT?PCR技术检测Hsa_circ_0016600在肺腺癌组织及细胞系中的表达情况.根据转染肺腺癌细胞不同分为:Si?NC组(Si?NC转染肺腺癌细胞)、Si?circ组(Si?hsa_circ_0016600转染肺腺癌细胞)、Si?TGFA组(Si?TGFA转染肺腺癌细胞)、miR?NC组(miR?1298?NC转染肺腺癌细胞)、miR?mimics组(miR?1298?mimics转染肺腺癌细胞)、miR?inh组(miR?1298?inhibitors转染肺腺癌细胞)、Si?circ+miR?NC组(Si?circ、miR?NC转染肺腺癌细胞)、Si?circ+miR?inh组(Si?circ、miR?inh转染肺腺癌细胞)、si?NC+miR?NC组(si?NC、miR?NC转染肺腺癌细胞)、miR?NC+pcDNA3.1组(miR?1298?NC、pcDNA3.1转染肺腺癌细胞)、miR?mimics+TGFA组(miR?mimics、TGFA转染肺腺癌细胞)和miR?mimics+pcDNA3.1组(miR?mimics、pcDNA3.1转染肺腺癌细胞).应用克隆形成实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测上述干预对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;通过蛋白免疫印迹法检测经上述分组干预后对目的蛋白TGFA表达的影响. 结果 高通量测序筛选出在肺腺癌组织中高表达的环状RNA hsa_circ_0016600.克隆形成实验显示,A549和PC9中Si?circ组的克隆形成率[(2.07±0.40)、(2.90±0.40)]明显低于Si?NC组[(5.33±0.35)、(7.30±0.36)],差异有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验表明,A549和PC9细胞中Si?circ组的迁移率较Si?NC组明显降低(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,A549和PC9细胞中Si?circ组的侵袭细胞数明显低于Si?NC组(P<0.05).A549和PC9中Si?TGFA组的克隆形成率、侵袭细胞数、迁移率明显低于Si?NC组(P<0.05).与Si?circ+miR?NC组比较,Si?circ+miR?inh组细胞克隆形成率在A549细胞及PC9细胞中明显升高(P<0.01);划痕实验显示,Si?circ+miR?inh组A549及PC9的迁移率较Si?circ+miR?NC组增高(P<0.01);侵袭实验表明,Si?circ+miR?inh组A549及PC9侵袭细胞数较Si?circ+miR?NC组明显增多(P<0.01).miR?mimics+TGFA组TGFA的表达、侵袭细胞数、细胞迁移率较miR?mimics+pcDNA3.1组增加(P<0.01). 结论 Hsa_circ_0016600/miR?1298/TGFA轴促进人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,为肺腺癌的治疗提供新的理论依据.