基于FABP4/PPAR-γ/NF-κB信号通路探讨芪参汤对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏炎症的影响

目的 观察芪参汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏炎症的影响,从FABP4/PPAR-γ/NF-κB信号通路探讨其作用机制.方法 通过GEO数据库筛选NAFLD差异表达基因.以高脂饲料喂养构建NAFLD小鼠模型,将小鼠分为空白组、模型组、芪参汤组和二甲双胍组,分别予相应药物干预,于第12、16周采用HE染色、油红O染色检测肝组织病理形态,生化分析仪检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α及CXC趋化因子受体3(CXCR3)、趋化因子C-C-基元配体4(CCL4)含量,Western blot和qRT-PCR检测肝组织脂肪酸结合蛋白4(FABP4)表达.以棕榈酸诱导建立RAW264.7细胞炎症模型,将细胞分为空白组、模型组、芪参汤组和抑制剂组,加入相应药物培养后,ELISA检测细胞上清液IL-1β、TNF-α、CXCR3、CCL4含量,Western blot检测FABP4/PPAR-γ/NF-κB信号通路相关蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚群比例.结果 共筛选出1246个差异表达基因(493个上调、753个下调),其中脂肪酸结合蛋白4(FABP4)表达在NAFLD发展过程中有显著差异.动物实验结果显示,与空白组比较,模型组小鼠肝细胞肿胀,呈气球样变,肝小叶结构紊乱,有明显炎症细胞浸润和大量脂滴形成,第12、16周NAFLD活动积分和油红O染色面积显著增加(P<0.01),血清AST、ALT、IL-1β、TNF-α、CXCR3、CCL4含量显著增加(P<0.01),肝组织FABP4蛋白和mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,芪参汤组小鼠肝脏脂肪变程度、炎症细胞浸润和脂滴明显减少,第12、16周NAFLD活动积分和油红O染色面积显著减少(P<0.01),血清AST、ALT、IL-1β、TNF-α、CXCR3、CCL4含量显著减少(P<0.05,P<0.01),肝组织FABP4蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01).细胞实验结果显示,与空白组比较,模型组细胞上清液IL-1β、TNF-α、CXCR3、CCL4含量显著增加(P<0.01),细胞FABP4、p-κB抑制因子激酶(IKK)α、p-NF-κB抑制因子(IκB)α及细胞核核因子(NF)-κB p65蛋白表达显著升高,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ、IκBα及细胞质NF-κB p65蛋白表达显著降低(P<0.01),Ly6Clow亚群比例显著减少,Ly6Chigh亚群比例显著增加(P<0.01);与模型组比较,芪参汤组细胞上清液IL-1β、TNF-α、CXCR3、CCL4含量显著减少(P<0.01),细胞FABP4、p-IKKα、p-IκBα及细胞核NF-κB p65蛋白表达显著降低,PPAR-γ、IκBα及细胞质NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01),Ly6Clow亚群比例显著增加,Ly6Chigh亚群比例显著减少(P<0.01).结论 芪参汤可能通过抑制FABP4/PPAR-γ/NF-κB信号通路活化,进而促进Ly6Chigh细胞亚群向Ly6Clow细胞亚群转化,治疗NAFLD肝脏炎症.