miR-34a-5p靶向Smad4抑制子宫内膜纤维化的机制研究

目的:探讨miR-34 a-5 p在子宫内膜纤维化中的作用及机制.方法:收集正常及宫腔粘连患者的子宫内膜组织,实时定量PCR检测子宫内膜组织中miR-34 a-5 p表达水平.子宫内膜间质细胞(hESC)转染miR-34a-5p mimics(或mimics对照)或Smad4过表达质粒,并用转化生长因子-β1(TGF-β1)处理.CCK-8检测细胞增殖能力.实时定量PCR和Western blot法检测纤维化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和胶原蛋白Ⅰ(COL1A1)的mRNA和蛋白表达水平.生物信息学软件预测miR-34 a-5 p的靶基因并用双荧光素酶报告基因方法验证.结果:与正常患者相比,宫腔粘连患者子宫内膜组织中miR-34 a-5 p水平降低.TGF-β1处理后可显著降低hESC细胞中miR-34 a-5 p水平,增加细胞增殖率.与阴性对照NC相比,转染miR-34 a-5 p mimics可显著降低hESC细胞的增殖率,以及 α-SMA、FN和COL1 A1的mRNA和蛋白表达水平.Smad4经鉴定是miR-34 a-5 p的靶基因.过表达Smad4可逆转miR-34 a-5 p mimics抗增殖及抗纤维化作用,表现为hESC细胞增殖率增加,α-SMA和COL1 A1表达水平增加.结论:miR-34 a-5 p通过下调Smad4抑制TGF-β1诱导的hESC细胞增殖和纤维化.