sRNA STnc290对鼠伤寒沙门菌侵染细胞及致病力的影响

[目的]鼠伤寒沙门菌(STM)是一种可感染人和多种动物的重要人兽共患病原菌,故有必要研究STM小RNA(sRNA)ST-nc290基因的分子特征和在细菌的细胞侵染及小鼠致病性中的作用.[方法]通过PCR扩增STM sRNA STnc290基因,并利用生物信息学软件分析STnc290基因的序列特征、二级结构分子特征及预测潜在靶基因.同时,利用λ-Red同源重组系统构建STnc290基因缺失株及回补株;通过分析STM-SL1344、STM-△STnc290及△STnc290/STnc290在侵染细胞、小鼠半数致死剂量、小鼠存活率、致病小鼠肝脾载菌量和小鼠肝脾病理变化差异,利用qRT-PCR检测STnc290基因调控的潜在靶基因转录水平.[结果]sRNAST-nc290基因大小为79 bp,其上游序列含有-10 box和-35 box的启动子核心序列TGATATATA和CTGACA,并且还存在σ因子rpoD16结合位点AAATAATT;STnc290基因的二级结构含有典型的茎环结构;通过在线软件预测发现STnc290 基因2个潜在的靶基因为pqaA 和 narX 基因.STM-SL1344、STM-△STnc290 及 △STnc290/STnc290 菌株生长测定显示,与 STM-SL1344 和 △STnc290/STnc290 回补株相比,STnc290基因缺失株在生长特性上无明显差异(P＞0.05);与STM-SL1344株相比,STM-△STnc290对小鼠巨噬细胞RAW264.7的黏附、侵袭能力均显著减弱(P＜0.05);STM-△STnc290株感染小鼠半数致死剂量显著升高(P＜0.05);STM-△STnc290株感染的小鼠存活率显著高于亲本株(P＜0.05);STM-△STnc290株感染小鼠肝脾载菌量在感染后第7、9天显著降低(P＜0.05).qRT-PCR检测表明,STnc290基因缺失株靶基因pqaA和narX转录水平均显著下调(P＜0.05).[结论]sRNA STnc290对STM侵染细胞及小鼠致病性具有重要的调控作用.