MicroRNA-520e通过靶向抑制AEG-1发挥抗结直肠癌特性

目的:探究MicroRNA-520e(miR-520e)在结直肠癌中的表达模式及其对细胞功能的影响.方法:采用qRT-PCR方法检测47例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织中miR-520e和星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)的mRNA表达水平.将SW480细胞分为对照组、miR-520e-mimic 组、NC-mimic 组、miR-520e-inhibitor 组、NC-inhibitor 组、miR-520e-mimic+AEG-1-pcDNA3.1 组和miR-520e-mimic+NC-pcDNA3.1组.通过MTT法检测SW480细胞的增殖,通过Annexin V-FITC/PI双染色试剂盒检测细胞凋亡,通过Transwell检测细胞迁移和侵袭,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520e和AEG-1的靶向关系,通过qRT-PCR或Western blotting 检测 AEG-1、基质金属蛋白酶 2(MMP2)、MMP9、NF-κB p65(p65)和磷酸化的 NF-κB p65(p-p65)的表达.结果:与癌旁组织相比,结直肠癌组织中miR-520e的表达水平降低(t=9.353,P＜0.001).与对照组相比,miR-520e-mimic组的OD490nm值降低,细胞凋亡率升高,细胞迁移和侵袭数量降低,MMP2、MMP9和p-p65蛋白表达水平降低(P＜0.001).与对照组相比,miR-520e-inhibitor组的OD490nm值升高,细胞凋亡率降低,细胞迁移和侵袭数量升高,MMP2、MMP9和p-p65蛋白表达水平升高.与NC-mimic组相比,miR-520e-inhibitor组的相对荧光素酶活性降低(P＜0.001).与对照组相比,miR-520e-mimic组的AEG-1的mRNA 和蛋白表达水平均 降低,而 miR-520e-inhibitor 组均升高(P＜0.001).与 miR-520e-mimic+NC-pcDNA3.1 组相比,miR-520e-mimic+AEG-1-pcDNA3.1组的AEG-1的mRNA和蛋白表达水平升高,OD490nm值升高,细胞凋亡率降低,迁移和侵袭细胞数增加,MMP2和MMP9的蛋白表达水平及p65的磷酸化水平均增加(P＜0.001).结论:miR-520e在结直肠癌中表达降低,可通过靶向抑制AEG-1来发挥抗结直肠癌特性,其抗癌机制可能通过NF-κB信号通路介导.