Aplicação da genotipagem de grupos sanguíneos em casos complexos de imuno-hematologia

Os sistemas de grupos sanguíneos eritrocitários são representados por antígenos localizados na superfície das hemácias, os quais quando transfundidos a um receptor que não os possui, podem resultar em aloimunização e causar reações transfusionais hemolíticas agudas e tardias, Doença Hemolítica do Feto e do Recém Nascido (DHFRN), danos a tecidos transplantados, e menor número de doadores compatíveis. Para evitar tais complicações, recomenda-se a transfusão de concentrados de hemácias compatíveis com o receptor, principalmente quando se tratam dos antígenos dos sistemas de grupos sanguíneos mais imunogênicos, como Rh (E,e,C,c), Kell, Kidd, Duffy e MNS. A genotipagem dos grupos sanguíneos pode ser utilizada como técnica auxiliar quando as técnicas convencionais apresentam limitações, seja devido a expressão fraca ou alterada dos antígenos, população mista de células em pacientes politransfundidos, teste de antiglobulina direta positivo, falta de anti soros comerciais disponíveis, ou na busca de doadores com fenótipos raros em larga escala. Realizar a genotipagem de grupos sanguíneos de amostras de sangue de pacientes atendidos pelo Centro de Hematologia e Hemoterapia do Paraná (HEMEPAR), que necessitam de transfusão e cujas fenotipagens foram inconclusivas ou incompletas. As amostras de sangue total foram obtidas do HEMEPAR, e o DNA genômico foi extraído utilizando-se kit de extração por coluna. Os fragmentos de interesse foram amplificados por Reação em Cadeia de Polimerase - Sequência Específica de Primers (PCR-SSP) para os antígenos eritrocitários: RHCE (RHCE*C, RHCE*c, RHCE*E e RHCE*e), Kell (KEL*01, KEL*02), Duffy (FY*01, FY*02) e Kidd (JK*01, JK*02), além da pesquisa pela mutação do gene GATA (FY*02N.01). Os produtos amplificados foram separados por meio de eletroforese em gel de agarose a 1% com revelador GelRED, e posteriormente revelados em fotodocumentador. Foram analisadas 12 amostras de pacientes politransfundidos, sendo encontradas discrepâncias entre fenotipagem e genotipagem para 1 amostra no sistema Rh (E) e para 4 amostras no sistema Kidd. Além disso foram encontradas 9 amostras com a mutação em GATA. A maior quantidade de discrepâncias foi observada em Kidd, além disso foram encontrados 9 casos de silenciamento do antígeno Fyb atribuídos à mutação em GATA, que se apresentou positiva em todos os indivíduos com fenótipo Fy(a-b-). As técnicas utilizadas também solucionaram as fenotipagens inconclusivas causadas por duplas populações, as quais não interferem nos métodos moleculares. Os resultados obtidos demonstram a contribuição da genotipagem de grupos sanguíneos como técnica auxiliar, principalmente em casos complexos de imuno-hematologia, otimizando a liberação de bolsas de sangue adequadas à segurança transfusional, além da ampliação do número de doadores compatíveis para pacientes com o fenótipo Fy(a-b-) relacionados com o alelo FY(02N.01).