2种重叠延伸PCR技术构建5种立克次体融合基因的方法学比较

目的 采用2种重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将5种立克次体目的 基因片段进行融合,同时对2种方法 进行比较.方法 采用一步法及两步法融合基因技术,对5种立克次体融合基因进行构建,并优化一步法中重叠引物浓度以及两步法中各靶基因产物加入量,以提高2种方法 的融合效率.结果 成功建立5种立克次体融合基因.一步法基因融合过程中重叠引物浓度在0.1～0.01μmol/L时,912 bp的融合基因条带亮度较高,且杂带较少;两步法基因融合过程中各靶基因产物加入量为0.1～0.25μL时,912 bp的融合基因条带亮度较高,且杂带较少.结论 一步法基因融合技术操作简单、耗时短且耗材少,在掌控好退火时的温度及时间的情况下是一种经济、方便且高效的融合技术.为后续进行立克次体融合基因表达载体构建以及立克次体分子生物学多重检测提供实验模板.