产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定及普鲁兰酶基因的克隆表达及其性质分析

本研究从广西防城港市北仑河口红树林土壤沉积物中筛选到1株产普鲁兰酶细菌GXM-1,利用形态学和16S rRNA序列进行分析鉴定,结果表明该菌株为Bacillus licheniforms;采用同源克隆策略获得了Bacillus licheniforms GXM-1 普鲁兰酶基因(pulM),在 Escherichia coli BL21 中实现了 pulM 的可溶性表达.纯化普鲁兰酶的比活力为72.6 U/mg,最适反应温度为40℃,最适pH为6.5,Km=(6.442±0.466 8)mg/mL,Vmax=(89.84±2.795)μmol·min1·mg1,40℃C保温4 h相对残余酶活力为40％,在pH 7.0～8.0缓冲液中保存12 h,相对残余酶活力保持在80％以上,金属离子Ca2+、Na+、Li+和Ni+对PulM的酶活力有明显的激活作用.研究结果为普鲁兰酶在工业中的应用研究提供了新的思路.