粉防己碱基于膜受体干预的抗肿瘤作用机制研究

目的:研究粉防己碱通过干预人肝癌HepG2细胞膜受体进而诱导HepG2细胞凋亡的抗肿瘤机制.方法:CCK-8法检测HepG2细胞的增殖情况;倒置显微镜、荧光显微镜观察HepG2细胞形态;流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率.试剂盒检测HepG2细胞膜总蛋白、胆固醇、唾液酸含量;荧光染色技术检测HepG2细胞膜流动性;试剂盒检测HepG2细胞膜封闭度及Na+,K+-ATPase、Ca2+,Mg2+-ATPase活性变化;Western blot法检测HepG2细胞膜葡萄糖转运蛋白(GLUT-1)和氨基酸转运蛋白(LAT-1)及HepG2细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cyt-c)表达;试剂盒检测Caspase-3蛋白活性.结果:粉防己碱对HepG2细胞具有增殖抑制作用;形态学观察显示给药组细胞排列变得稀疏,多数细胞由梭形和多角形变成了圆形;同时细胞间轮廓变模糊,出现细胞碎裂现象,细胞核固缩形成凋亡小体.流式细胞仪检测结果显示各给药组出现明显的凋亡峰.粉防己碱各给药组细胞膜总蛋白、胆固醇、唾液酸含量均显著降低,同时细胞膜的流动性和封闭度显著降低,其作用呈浓度依赖性.粉防己碱各给药组细胞膜Na+,K+-ATPase和Ca2+,Mg2+-AT-Pase活性显著降低,GLUT-1、LAT-1蛋白表达显著下调,细胞Cyt-c蛋白表达及Caspase-3活性显著升高,Bcl-2/Bax水平显著降低.结论:粉防己碱能通过干预肿瘤细胞膜受体诱导肝癌HepG2细胞发生凋亡.