miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的 探讨miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 将ARPE-19细胞分为4组:对照组、转化生长因子(TGF)-β1组、miR-34a-5p过表达组与复合干预组,对照组与TGF-β1组采用Lipofectamine 2000转染试剂转染对照模拟物,miR-34a-5p过表达组与复合干预组转染miR-34a-5p模拟物,培养24 h后采用无血清培养基饥饿培养12 h,TGF-β1组与miR-34a-5p过表达组均添加10 mg·L-1的TGF-β1,复合干预组添加10 mg·L-1的TGF-β1与10μmol·L-1的TGF-β通路激活剂SRI-011381,各组细胞继续培养24 h,测定细胞增殖、迁移与EMT.采用Western blot检测细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白的表达水平,Ki67荧光染色检测细胞增殖情况,免疫荧光染色测定细胞EMT相关蛋白表达情况,划痕实验和Tran-swell实验测定细胞的迁移和侵袭能力.结果 与对照组相比,TGF-β1组细胞内TGF-β受体(TGF-βR)1、TGF-βR2、磷酸化Smad2(p-Smad2)和p-Smad3的表达水平均增高(均为P<0.05).与TGF-β1组相比,过表达miR-34a-5p能够明显逆转TGF-β1对TGF-β/Smad信号通路的激活作用.与miR-34a-5p过表达组相比,复合干预组细胞内TGF-β/Smad信号通路明显被激活.与TGF-β1组相比,miR-34a-5p过表达组细胞Ki67阳性率为(6.67±1.52)％,明显降低(P<0.05).与miR-34a-5p过表达组相比,复合干预组细胞Ki67阳性率为(16.67±1.53)％,显著升高(P<0.05).划痕实验和Transwell实验结果显示:与对照组相比,TGF-β1能够促进ARPE-19细胞迁移和侵袭.过表达miR-34a-5p能够明显抑制TGF-β1组ARPE-19细胞的迁移和侵袭能力.在复合干预组内,TGF-β通路激活剂SRI-011381能够明显逆转过表达miR-34a-5p对ARPE-19细胞迁移能力的抑制作用.免疫荧光染色结果显示:与对照组相比,TGF-β1能够明显提高ARPE-19细胞内α-SMA和纤维连接蛋白表达水平,并抑制钙黏蛋白E的表达.与TGF-β1组相比,过表达miR-34a-5p能够明显抑制ARPE-19细胞发生EMT.在复合干预组内,TGF-β通路激活剂SRI-011381能够缓解过表达miR-34a-5p对ARPE-19细胞EMT的抑制作用.结论 miR-34a-5p通过靶向失活TGF-β/Smad信号通路抑制ARPE-19细胞的增殖、迁移与EMT.