小反刍兽疫核酸疫苗的制备及免疫效果评估

为了制备针对小反刍兽疫病毒(Peste des peties ruminants virus,PPRV)F基因的核酸疫苗,并评价其对小鼠的免疫效果,试验采用DNA重组技术将F基因、优化密码子后的F基因以及连接乙型脑炎病毒信号肽(JEVSP)的优化密码子后的F基因3个目的片段分别克隆到真核表达载体pcD?NA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)-F、pcDNA3.1(+)-F-opt和pcDNA3.1(+)-JEVSP-F-opt,大量培养重组质粒菌后,以碱裂解法将菌体悬浮裂解,经中空纤维切向流超滤和微滤浓缩处理,将制备的核酸疫苗以100μg/只的剂量给Balb/c小鼠肌肉注射免疫,共分为4组,pcDNA3.1(+)-F组、pcDNA3.1(+)-F-opt组、pcDNA3.1(+)-JEVSP-F-opt组和pcDNA3.1(+)空载体组,每隔14 d免疫1次,共免疫3次,每次免疫14 d后利用中和试验检测抗体水平.结果表明:成功制备核酸疫苗pcD?NA3.1(+)-F、pcDNA3.1(+)-F-opt和pcDNA3.1(+)-JEVSP-F-opt,免疫Balb/c小鼠14 d后pcD?NA3.1(+)空载体免疫组中和抗体阳性率为0,pcDNA3.1(+)-F组、pcDNA3.1(+)-F-opt组、pcD?NA3.1(+)-JEVSP-F-opt组抗体转阳性,且pcDNA3.1(+)-F-opt组、pcDNA3.1(+)-JEVSP-F-opt组抗体水平呈逐渐增加的趋势.说明成功制备小反刍兽疫核酸疫苗,并且能在小鼠上产生抗体.