丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/Akt通路逆转人喉癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 研究丹参酮ⅡA对人喉癌细胞顺铂耐药的影响作用及机制.方法 以不同质量浓度(0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L)顺铂干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞和人喉癌顺铂耐药细胞(Hep-2/DDP)48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI).以不同质量浓度(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L)丹参酮ⅡA干预对数生长期Hep-2细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC50;采用丹参酮ⅡA(IC505.32 mg/L)+不同质量浓度(0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0 mg/L)顺铂干预对数生长期Hep-2/DDP细胞48 h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算2种药物联用的IC50和逆转倍数(RF).取对数生长期Hep-2/DDP细胞,设置对照组、顺铂组、丹参酮ⅡA+顺铂组、丹参酮ⅡA+顺铂+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组.各组分别给药干预48 h后,采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blotting法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(Akt)蛋白表达情况.结果 顺铂对Hep-2细胞的IC50为4.58 mg/L,对Hep-2/DDP细胞的IC50为14.09 mg/L,RI为3.08;丹参酮ⅡA对Hep-2细胞的IC50为5.32 mg/L;丹参酮ⅡA联合顺铂对Hep-2/DDP细胞的IC50为3.34 mg/L,RF为4.22.与对照组比较,顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P<0.01);与顺铂组比较,丹参酮ⅡA+顺铂组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P<0.05);与丹参酮ⅡA+顺铂组比较,丹参酮ⅡA+顺铂+IGF-1组Hep-2/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低(P<0.05).与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高(P<0.05).与顺铂组比较,丹参酮ⅡA+顺铂组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著降低,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著升高(P<0.05).与丹参酮ⅡA+顺铂组比较,丹参酮ⅡA+顺铂+IGF-1组Hep-2/DDP细胞Bcl-2表达量显著升高,Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9表达量和Bax/Bcl-2值显著降低(P<0.05).与对照组相比,顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化(p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt)水平显著降低(P<0.05).与顺铂组比较,丹参酮ⅡA+顺铂组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著降低(P<0.05).与丹参酮ⅡA+顺铂组比较,丹参酮ⅡA+顺铂+IGF-1组Hep-2/DDP细胞p-PI3K、p-Akt表达量及PI3K、Akt磷酸化水平显著升高(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA可逆转人喉癌细胞顺铂耐药,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路活化而促进喉癌细胞凋亡有关.