基于PANA 9600E全自动核酸工作站的超敏HBV DNA定量检测性能评价

目的:对全自动核酸工作站PANA 9600E的超敏HBV DNA定量检测性能进行评价,评估其是否满足临床应用要求.方法:参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)和中国合格评定国家认可委员会(CNAS)等相关文件,采用天隆PANA 9600E全自动核酸工作站及其配套HBV DNA超敏定量检测试剂和GENTIER 96E实时荧光定量PCR仪,应用HBV DNA血清标准物质、临床混合血清样本和乙型肝炎病毒核酸国家标准品,对该检测系统的正确度、精密度、线性范围、定量限、检出限、防交叉污染、抗干扰能力等性能进行评价;同时与NP968-C半自动系统检测56例临床血清样本进行方法学比对.结果:①PANA 9600E系统检测HBV DNA血清标准物3个浓度4.60×106、1.41×103和2.00×102 IU/mL的均值与靶值的差值绝对值均小于0.40 log10IU/mL,正确度满足行业标准;检测2.0×102、2.0×103、2.0×104和2.0×106 IU/mL 4个浓度的临床混合血清样本,重复性精密度CV分别为3.93％、1.50％、0.89％和0.54％,中间精密度CV分别为5.00％、1.95％、1.36％和1.35％,精密度验证通过;②PANA 9600E系统在3.0×101 IU/mL～3.0×108IU/mL内呈线性,线性回归方程为Y= 1.028 5X-0.075 8,R2=0.999 4;定量限为30 IU/mL,检出限为10 IU/mL;防交叉污染验证通过,阴性样本检测结果均为阴性;当胆红素≤512 μmol/L、血红蛋白≤100 mg/mL、甘油三酯≤18 mmol/L时对该系统的检测结果无明显影响,抗干扰能力验证通过;③对于56例临床血清样本,PANA 9600E和NP968-C系统检出的阳性率分别为60.71％(34/56)和57.14％(32/56),差异无统计学意义(P＞0.05),Kappa值为0.852 6(95％CI:0.713 9～0.991 4),一致性较好;对于定量范围内的19例临床血清样本,PANA 9600E和NP968-C系统的检测值分别为3.954±1.850、3.828±1.916 log10IU/mL,差异有统计学意义(P＜0.05);进一步进行Pearson相关和Bland-Altman图分析,回归方程为Y=1.030 9X-0.249 5,R2 =0.990 5;2种方法检测结果差值为(0.125 8±0.195 3)log10IU/mL,95％一致性界限为-0.256 9～0.508 5 log10 IU/mL,94.74％(18/19)的点在95％一 致性界限以内,界外点数为1(5.26％).结论:基于PANA 9600E全自动核酸工作站的超敏HBV DNA定量检测系统的正确度、精密度、线性范围、定量限、检出限、抗交叉污染、抗干扰能力等性能良好;定量限为30 IU/mL,检出限为10 IU/mL,达到超敏检测的要求;与现用的NP968-C半自动系统的检测结果具有可比性,相关性和一致性好,可满足临床应用要求.