西尼罗病毒装甲RNA质控品的制备

目的 制备一种西尼罗病毒装甲RNA质控品,用于西尼罗病毒核酸检测的全过程质控.方法 依据行业标准的引物WN233/WN640c、WN1160/WN1209序列,扩增西尼罗病毒衣壳蛋白C部分基因片段,将其克隆至含有MS2噬菌体衣壳蛋白基因的表达质粒pET32a-CP中,经原核表达后获得的病毒样颗粒即为装甲RNA.用DNaseI和RNase A消化装甲RNA,提取RNA,进行RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR检测.将装甲RNA在4℃、-20℃和37℃保存15 d,定时提取RNA进行检测.结果 参照行业标准,用RT-PCR和荧光定量PCR均能扩增酶消化后的病毒样颗粒RNA,表明制备的装甲RNA含有插入的目的基因片段C,且耐受核糖核酸酶的降解.装甲RNA在4℃、-20℃和37℃环境中保存5～15 d,用RT-PCR和荧光定量PCR仍能扩增到特异性目的条带,有扩增曲线,表明制备的病毒样颗粒在4℃、-20℃和37℃可以至少保存15 d.结论 制备的西尼罗病毒装甲RNA病毒样颗粒可以作为西尼罗病毒核酸检测的质控品,实现对检测全过程的质量控制.