多酶恒温核酸快速扩增法检测大肠杆菌0157∶H7

[目的]采用多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)荧光法,结合金属有机骨架免疫磁珠富集功能,开发大肠杆菌0157∶H7快速富集和检测方法.[方法]以rfbE基因为靶标,筛选引物、探针及优化反应体系,同时考察该方法的特异性、灵敏度和实际应用情况.[结果]检测大肠杆菌0157∶H7菌体的检测限为1.18×105CFU·mL-1,菌体DNA质量浓度检测限为9pg·μL-1,检测过程可在20min内完成.47株菌(24株目标菌和23株非目标菌)特异性验证结果与实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法一致.[结论]该研究开发了一种基于金属有机骨架免疫磁珠富集结合MIRA的检测方法,该法操作简单、反应迅速,适用于食品中大肠杆菌0157∶H7的快速富集和检测.