长链非编码RNA n336928对胃肠胰神经内分泌肿瘤细胞增殖及迁移的影响

目的:从基础实验层面研究长链非编码RAN n336928(LncRNA n336928,即n336928)在胃肠胰神经内分泌肿瘤(Gastro-en-tero-pancreatic neuroendocrine tumors,GEP-NETs)进展中的作用与影响.方法:首先采用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测n336928在人正常胰腺导管上皮细胞系(hTERT-HPNE)、GEP-NETs细胞株(QGP-1、STC-1)中表达情况.采用靶向n336928的小干扰(si-RNA),以转染试剂lipo3000为载体进行敲降.通过CCK8法、克隆实验和EdU实验观察细胞增殖活力,通过Transwell实验观察细胞迁移能力变化,通过流式分析实验检测n336928敲低是否与周期阻滞和细胞凋亡相关,并用Western blotting检测周期和凋亡相关标志性蛋白表达.结果:QGP-1和STC-1中n336928的mRNA水平的表达相较于hTERT-HPNE明显升高(P＜0.05),抑制QGP-1及STC-1中n336928的表达后,细胞的增殖及迁移能力明显减弱(P＜0.05).QGP-1细胞转染n336928小干扰后,细胞周期主要阻滞在G1/S期,且细胞凋亡明显增加.与对照组相比,敲降组的周期相关蛋白(CyclinD1)明显减少,相反凋亡相关蛋白(Caspase3)明显升高(P＜0.05).为了进一步研究基因作用机制,我们用RNA免疫沉淀反应(RIP)验证n336928可与EZH2结合,并共同调控下游基因P21.结论:LncRNA n336928可通过结合EZH2并表观调控下游基因P21,而参与胃肠胰神经内分泌肿瘤的发生发展过程.