补阳还五汤合参芪地黄汤化裁含药血清对高糖诱导人肾小管上皮细胞株间充质转化的影响及机制研究

目的:观察补阳还五汤合参芪地黄汤化裁含药血清对肾小管上皮细胞间充质转化及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响.方法:10只SD大鼠随机分为空白血清组和中药血清组,中药血清组给予补阳还五汤合参芪地黄汤化裁灌服,空白血清组灌以同等体积的饮用水,连续灌胃7d.成功制备空白血清和中药血清,培养人近端肾小管上皮细胞(human proximaltubular epithelial cell line,HK-2),细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CKK8)筛选空白血清及中药血清最佳干预浓度,以及最佳干预时间.将HK-2细胞分为正常组(葡萄糖5.5 mmol/L+10％空白血清)、对照组(葡萄糖5.5 mmol/L+10％中药血清)、模型组(葡萄糖30 mmol/L+10％空白血清)、中药组(葡萄糖30 mmol/L+10％中药血清),显微镜下观察各组细胞形态学变化,免疫荧光法检测钙黏附蛋白-E(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin alpha,α-SMA)表达,Western blot法检测Wnt4及β-catenin的表达.结果:CCK8筛选出最佳空白血清和中药血清干预浓度均为10％,最佳干预时间为48 h,与正常组比较对照组HK-2形态、E-cadherin和α-SMA的表达以及Wnt4和β-catenin的表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与正常组比较模型组HK-2细胞变成长梭形,细胞间隙变大,E-cadherin表达减少,而α-SMA表达增多,Wnt4及β-catenin的表达量明显增多,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较中药组HK-2细胞形态及密度有一定逆转,E-cadherin表达增多,而α-SMA表达减少,Wnt4及β-catenin的表达量均显著减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论:补阳还五汤合参芪地黄汤化裁含药血清可以改善高糖诱导的HK-2细胞株的间充质转化,并与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.