肝脏H19在p,p-DDE干扰糖代谢关键基因中的作用

目的 研究肝脏长链非编码RNA H19在2,2-双(4-氯苯基)-1,1-二氯乙烯(p,p'-DDE)干扰糖代谢关键基因中的作用.方法 取人胚胎肝细胞(CCC-HEL-1)分为溶剂对照(DMSO)组、0.1 μmol/L p,p'-DDE组、1 μmol/L p,p'-DDE组、10 μmol/L p,p'-DDE组、siRNA+DMSO组、siRNA+10 μmol/L p,p'-DDE组;分别采用亚硫酸氢盐法、实时荧光定量PCR法和BCA法检测各组肝细胞核因子4α(HNF4α)、叉头框转录因子O1(FoxO1)和胰岛素样生长因子2(IGF2)的启动子区域甲基化、mRNA表达和蛋白表达水平;比较各组H19 mRNA表达水平和相关基因启动子区域甲基化水平及后续转录表达的变化.结果 不同剂量p,p'-DDE单独暴露后,H19表达增加,10 μmol/L p,p'-DDE组H19 mRNA表达水平高于DMSO组(1.31±0.25和1.02±0.22;P＜0.05).与DMSO组比较,10 μmol/Lp,p'DDE组HNF4α基因启动子甲基化水平降低[(38.59±32.77)％和(61.43±24.64)％]、mRNA表达水平升高(1.33±0.26和1.03±0.28),差异均有统计学意义(P＜0.05);FoxO1和IGF2基因启动子甲基化、mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05).经siRNA转染H19沉默后,与10 μmol/L p,p'-DDE组比较,siRNA+DMSO组HNF4α基因启动子甲基化水平升高[(71.33±22.23)％和(38.59±32.78)％]、mRNA 表达水平降低(0.71±0.17 和 1.33±0.26),FoxO1 基因启动子甲基化水平升高[(47.73±34.24)％和(25.09±25.35)％],IGF2 mRNA表达水平升高(1.39±0.25和0.80±0.20),并且IGF2蛋白表达水平高于DMSO组(1.03±0.11和0.74±0.12),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 肝细胞H19可通过调节基因启动子甲基化修饰程度,改变HNF4α、FoxO1和IGF2的转录与表达,在p,p'-DDE暴露诱发的糖稳态失调中发挥作用.