白木香转录因子AsNAC2的克隆及表达分析

目的 对珍稀南药沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis AsNAC2转录因子进行分子克隆,并对其进行生物信息学和表达模式分析.方法 以白木香茎的总RNA反转录的cDNA为模板,采用PCR技术获取基因编码序列(coding sequence,CDS)全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等特性;运用DNAMAN8.0和MEGA6.0等软件分别进行多序列比对和进化关系分析;利用qRT-PCR技术检测AsNAC2基因在不同组织和伤害胁迫下的表达特性.结果 克隆获得AsNAC2基因(GenBank注册号MT130201),开放阅读框(open reading frame,ORF)全长864 bp,编码1条由287个氨基酸组成的弱酸性的稳定的亲水性蛋白,该蛋白定位在细胞核中,不存在跨膜结构域.序列比对和系统进化树分析显示,AsNAC2蛋白N端具有典型的NAM结构域,与锦葵目中的可可、哥伦比亚锦葵和榴莲NAC 2-like蛋白亲缘关系近,属于NAC转录因子家族中的ATAF亚组.qRT-PCR结果显示,AsNAC2基因主要在健康白木香的根和茎中表达,全断干伤害可显著诱导茎中AsNAC2基因表达量的上调,在2h达到峰值,此后缓慢下降,至48 h基本恢复正常.结论 首次在白木香中克隆和鉴定了 AsM4C2基因,该基因易受伤害诱导表达,且在伤害早期相对应.