多房棘球蚴虫体蛋白介导NK细胞表面受体NKG2A对NK细胞功能的影响

目的 探讨多房棘球蚴虫体蛋白(Emp)介导自然杀伤(NK)细胞表面抑制性受体NK细胞凝集素样受体亚家族C成员A(NKG2A)对NK细胞功能的影响.方法 采集健康志愿者外周血,纯化NK细胞,按0.3×106个/孔(重悬至100μl RPMI 1640培养基),加至96孔细胞培养板,空白对照组不作处理,阴性对照组加入1μg/ml白细胞介素-12(IL-12)和IL-15各1μl,Emp组加入1μg/ml IL-12、IL-15各1μl和7081μg/ml Emp 2.5μl,转化生长因子-β1(TGF-β1)组(阳性对照组)加入1μg/ml IL-12、IL-15、TGF-β1各1μl,不足总量(104.5μl)的用RPMI 1640培养基调整,分别体外刺激培养24 h后,利用流式细胞术检测NK细胞表面受体NKG2A表达情况以及NK细胞和NKG2A+NK细胞分泌细胞因子[γ 干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、穿孔素]的功能变化.采用单因素方差分析法进行差异性分析,LSD或Dunnett检验法分析组间差异.结果 Emp组和TGF-β1组表达NKG2A的NK细胞百分比分别为(3.40±1.53)％、(3.00±1.07)％,均高于阴性对照组的(0.70±0.56)％(P<0.01).Emp组分泌IFN-γ 的NK细胞百分比为(42.38±15.94)％,与阴性对照组的(61.18±7.18)％比较差异无统计学意义(P>0.05);Emp组分泌IFN-γ 的NKG2A+NK细胞百分比为(25.25±11.57)％,低于阴性对照组的(48.88±12.78)％(P<0.05);两组分泌颗粒酶B、TNF-α、穿孔素的NK细胞和NKG2A+NK细胞百分比差异均无统计学意义(P>0.05).TGF-β1组分泌IFN-γ 的NK细胞和NKG2A+NK细胞百分比分别为(12.77±2.56)％、(15.17±6.34)％,均低于对应阴性对照组(P<0.01);两组分泌颗粒酶B、TNF-α、穿孔素的NK细胞和NKG2A+NK细胞百分比之间差异均无统计学意义(P>0.05).TGF-β1组NK细胞经TGF-β1刺激后分泌的IFN-γ 百分比低于Emp组,但两者差异无统计学意义(P>0.05).结论 Emp通过介导NK细胞表面受体NKG2A的表达上调而抑制NK细胞分泌IFN-γ的功能.