三阴性乳腺癌组织NFⅠⅩ表达临床意义及其功能

目的 探讨核因子Ⅰ/Ⅹ(NFⅠⅩ)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织的表达及对TNBC细胞的影响.方法 实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法检测NFⅠⅩ在乳腺癌细胞系中的表达.使用R包limma分析GEO数据库GSE76275基因表达谱中NFⅠⅩ在TNBC组织与non-TNBC组织中的表达.免疫组织化学方法检测30例2015-09-24-2016-01-15中国医学科学院肿瘤医院乳腺外科收治TNBC患者癌组织及癌旁组织中NFⅠⅩ的蛋白水平.应用Kaplan-Meier plot网站(www.km-plot.com)进行生存分析.使用特异性小分子干扰RNA(siRNA)敲降NFⅠⅩ,并分为阴性对照组(NC组)和敲降NFⅠⅩ组(siNFⅠⅩ组),分析其对TNBC细胞迁移、侵袭、成球、增殖以及细胞凋亡的影响.蛋白质印迹法检测敲降NFⅠⅩ后Bcl-2的表达变化.基因集富集分析(GSEA)NFⅠⅩ的潜在信号通路.结果 qPCR结果显示,NFⅠⅩ在TNBC细胞系LTT、MDA-MB-231、MDA-MB-468中mRNA相对表达量分别为1.011±0.181、0.208±0.030和0.770±0.168,在Luminal型乳腺癌细胞系MCF7、T47D中mRNA相对表达量分别为0.111±0.009、0.388±0.009,在HER2阳性乳腺癌BT474、SKBR3细胞系中mRNA相对表达量分别为0.008±0.000、0.037±0.006.TNBC细胞系中NFⅠⅩmRNA表达水平明显高于其他非TN-BC细胞系,F=51.100,P<0.001.蛋白质印迹检测也发现,TNBC细胞系中蛋白表达水平显著高于non-TNBC细胞系.GSE76275数据集的分析表明,在TNBC组织中NFⅠⅩ的mRNA水平上调,P<0.001.免疫组化结果显示,NFⅠⅩ主要位于细胞核内,在TNBC组织中阳性表达率为40％(12/30).临床相关性研究显示,NFⅠⅩ阳性表达与淋巴结转移有关联性,χ2=5.000,P=0.025.Kaplan-Meier plot生存期分析表明,NFⅠⅩ高表达与TNBC患者较差总生存期(HR=1.62,95％CI为1.09～2.39,P<0.05)和无复发生存期(HR=1.52,95％CI为1.16～1.98,P<0.01)相关.细胞迁移实验显示,LTT细胞中,siNFⅠⅩ组的迁移细胞数(74.33±3.06)显著少于NC组(129.00±5.57),差异有统计学意义,t=14.91,P<0.001;MDA-MB-468细胞中,siNFⅠⅩ组的迁移细胞数(66.33±12.70)少于NC组(127.00±12.12),差异有统计学意义,t=5.98,P<0.01.同样地,细胞侵袭实验显示,LTT细胞中siNFⅠⅩ组侵袭细胞数为(49.67±0.58)个,显著低于NC组的(88.00±7.55)个,差异有统计学意义,t=8.77,P<0.001;MDA-MB-468细胞中,siNFⅠⅩ组侵袭细胞数量为19.00±3.61,显著低于NC组(47.68±4.73),差异有统计学意义,t=8.35,P<0.01.无血清成球实验结果显示,LTT细胞中,NC组、siNFⅠⅩ组的成球数量分别为64.33±6.66、31.33±3.06,敲降NFⅠⅩ后显著抑制了LTT细胞的自我更新能力,t=7.80,P<0.01.细胞增殖实验发现,敲降NFⅠⅩ后显著降低LTT(t=4.16,P<0.01)和MDA-MB-468(t=5.14,P<0.01)的细胞增殖能力.另外细胞凋亡实验显示,敲降NFⅠⅩ组凋亡比例(14.30％±1.37％)较LTT细胞NC组(11.30％±0.86％)显著上升,差异有统计学意义,t=3.21,P<0.05.MDA-MB-468细胞系NC组细胞凋亡比例为9.23％±1.36％,敲降NFⅠⅩ组显著上升为20.61％±3.86％,t=4.82,P<0.01.此外蛋白质印迹结果显示,在NFⅠⅩ敲降的细胞系中Bcl-2下调.GSEA结果显示,NFⅠⅩ参与Wnt信号传导和粘着斑的调节,伪发现率(FDR)<0.25,P<0.05.结论 NFⅠⅩ在TNBC中高表达且与淋巴结转移及不良预后相关.NFⅠⅩ可促进TNBC细胞的迁移、侵袭、自我更新和增殖能力,并通过调控Bcl-2抑制细胞凋亡.