bvfA基因对布鲁氏菌S19株生物学特性及睾丸支持细胞影响的研究

为研究布鲁氏菌毒力因子A(bvfA)对牛布鲁氏菌(B.abortus)S19菌株生物学特性及其感染睾丸支持细胞(TM4细胞)的影响,本研究利用振荡比浊法(Dλ值法)测定S19(亲本株)、S19△bvfA(缺失株)及S19△bvfAlbvfA(回补株)3株菌的生长曲线;利用平板菌落计数法测定菌株对环境的应激水平、对TM4细胞的侵入能力及损伤性和对小鼠毒力的影响.结果显示:缺失株较亲本株和回补株生长速度显著降低(P＜0.05);缺失株在热、高盐、高渗、强酸和多粘菌素B条件下生长均受到抑制,而在氧化应激条件下生长良好(P＜0.05).感染TM4细胞3h时,缺失株未能侵入TM4细胞;12h时,缺失株侵入TM4细胞的数量少于亲本株(P＜0.01);24h和48h时,3株菌侵入TM4细胞的数量无显著性差异(P＞0.05).在感染12h和24h时,感染缺失株的TM4细胞死亡率高于感染亲本株的细胞死亡率(P＜0.01);在48h时,感染缺失株和感染亲本株的TM4细胞死亡率无显著性差异(P＞0.05).将各菌株腹腔注射感染小鼠,结果显示感染2周时缺失株感染小鼠的脾指数明显低于亲本株(P＜0.01),且感染1周、2周和4周时,感染缺失株小鼠的脾分离菌量均小于亲本株(P＜0.05).本研究结果首次证实:bvfA基因参与调控布鲁氏菌S19菌株对环境的适应性,影响S19菌株对TM4细胞的侵入,抑制TM4细胞的死亡以维持细菌的生长增殖及其缺失能够降低S19菌株对小鼠的毒力.本研究结果为布鲁氏菌致病机制和bvfA基因的功能解析提供实验依据.