鸭星状病毒3型TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据已报道的鸭星状病毒3型(duck astrovirus-3,DAstV-3)毒株的nsp1a基因序列设计并合成特异性引物和探针,经优化反应条件建立一种以nsp1a基因为靶标的检测DAstV-3的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果显示,该方法的Ct与标准品模板浓度在2.13×101～2.13×107拷贝/μL之间线性关系良好,相关系数R2和扩增效率分别为0.997和1.09;该方法仅特异性检出DAstV-3核酸,而对其他鸭常见病毒核酸无扩增反应;最低检测下限为21.30拷贝/μL;组内和组间重复试验变异系数分别为0.58％～2.19％和0.68％～2.53％,均低于5.00％;利用所建方法对临床采集的231份疑似DAstV-3感染病料进行检测,发现DAstV-3的阳性率为57.10％(132/231).结果表明,本试验所建方法操作简便、特异、敏感、重复性好,为DAstV-3的临床检测和流行病学调查提供技术支持.