猪圆环病毒-Ⅱ型、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及初步应用

针对猪圆环病毒-Ⅱ型(porcine circovirus type Ⅱ,PCV-Ⅱ)、猪瘟病毒(swine fever virus,CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的保守区域设计用 于构建荧光定量PCR体系的引物和探针.以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系,并对三重荧光定量PCR体系进行优化和特异性检测、灵敏性检测、重复性试验、标准曲线制作.最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系同时进行临床检测,并对两者的检测结果进行对比.结果显示,3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增;3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10拷贝/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5％以内;单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系.应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对106份临床组织样品进行检测,其中PCV-Ⅱ阳性检出率为74.5％,CSFV阳性检出率为34.9％,PRRSV阳性检出率为18.9％,普通PCR检测中PCV-Ⅱ阳性检出率为37.7％,CSFV阳性检出率为16.9％,PRRSV阳性检出率为7.5％.