聚合酶链式反应技术快速检测原料乳中荧光假单胞菌

目的 利用聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)技术建立一种快速、准确检测原料乳中最常见有害嗜冷微生物荧光假单胞菌的方法.方法 以荧光假单胞菌蛋白酶基因aprX为检测靶标,设计特异性PCR简并引物,建立原料乳中荧光假单胞菌PCR检测体系,对该体系的特异性及检出限进行评价.结果 筛选到特异性引物F3:5'-WSNGGNGGNGAYTTYCAYATGAC-3';R3:5'-RTCRTTNCCNCCNCCRTCCC-3',建立了最佳PCR检测体系:引物浓度0.5μmol/L、Taq DNA聚合酶添加量0.4μL、dNTPs浓度0.16 mmol/L、Mg2+浓度1.6 mmol/L,退火温度56.4℃,扩增35个循环.此检测方法对荧光假单胞菌具有特异性,检出限为2.57×103 CFU/mL.结论 本方法操作简便,特异性强,适用于快速检测原料乳中的荧光假单胞菌.