水生栖热菌漆酶TaLac的性质分析及对孔雀石绿染料的脱除

为挖掘适用于脱除有毒染料孔雀石绿(malachite green,MG)的DUF152家族漆酶,利用生物信息学方法在嗜热菌水生栖热菌中筛选候选酶TaLac,构建重组表达载体pET28a-TaLac,在大肠杆菌中进行过量表达和纯化,测定TaLac的酶学性质,探究TaLac对MG的脱色和脱毒能力.结果表明,TaLac具有DUF152家族保守铜原子结合位点,利用Ni亲和层析纯化得到高纯度的TaLac具有氧化2,6-二甲基苯酚(2,6-dimethylphenol,DMP)等漆酶底物的催化活性.以DMP为底物,该酶的最适pH为5.0,最适温度为60℃,Km为0.74 mmol/L.此外,TaLac在50℃热处理4 h后,仍保留80％的原始活力;该酶可耐受高浓度的Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+和Ba2+等金属离子.TaLac可于3 h内使50 mg/L MG完全脱色,并彻底消除MG对玉米萌发的毒害作用.因此,TaLac是具有活性的DUF152家族漆酶,具有良好的热稳定性,可高效催化MG的脱色与脱毒.