柚皮素对人自然杀伤细胞杀伤肝癌细胞的影响及其机制

目的 将人外周血单个核细胞体外扩增为自然杀伤(NK)细胞,与肝癌细胞1:1共培养.观察柚皮素对NK细胞杀伤率的影响并初步研究相关机制.方法 淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞,在体外经重组人白细胞介素2诱导培养NK细胞;0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L浓度柚皮素作用于人肝癌细胞0、24、48 h后CCK8检测肝癌细胞增殖情况;不同浓度柚皮素作用于人NK细胞24 h后,CCK8检测NK细胞增殖情况;柚皮素作用于NK-肝癌细胞1:1共培养体系24 h后,CellTiter-LumiTM检测NK细胞杀伤率;实时荧光定量PCR法检测NK细胞中激活型受体NKG2D的基因表达,以及肝癌细胞中NKG2D配体的基因表达.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 经重组人白细胞介素2诱导培养后,NK细胞可扩增至人外周血单个核细胞的82.33％ ±0.70％;柚皮素作用24 h后,所有质量浓度组CLC5肝癌细胞的增殖率无明显差异(P值均>0.05),25及50μmol/L质量浓度组柚皮素对NK细胞的增殖有较明显的促进作用(P值均<0.0001);柚皮素作用NK-肝癌细胞1:1共培养体系24 h后,25、50μmol/L浓度组对NK细胞杀伤率均有明显提高(P值均<0.0001);柚皮素作用于NK-肝癌细胞1:1共培养体系24 h后,25、50μmol/L浓度组柚皮素对NK细胞中NKG2D的表达均无影响,对肝癌细胞中MICB、ULBP2的表达亦无影响(P值均>0.05),对肝癌细胞中ULBP1、ULBP3等NKG2D配体的表达有明显上调作用(P值均<0.001).结论 柚皮素可能通过上调肝癌细胞中NKG2D配体表达,从而增加NK细胞的杀伤活性.