自噬在哮喘气道重塑中的作用研究

目的 探讨自噬是否参与屋尘螨(HDM)诱导的哮喘气道重塑,评估自噬抑制剂氯喹(CQ)在小鼠哮喘模型中的临床疗效.方法 用转化生长因子-β(TGF-β)单独或联合自噬抑制剂CQ共同体外培养人支气管上皮细胞,蛋白质印迹法(Western blot)检测气道重塑相关蛋白胶原蛋白Ⅰ(Collagen-Ⅰ)α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及自噬相关蛋白(LC3-Ⅰ/Ⅱ)表达.2、用6～8周龄的BALB/c小鼠建立HDM诱导过敏性哮喘动物模型,正常对照组用生理盐水替代;HDM+CQ组小鼠在HDM激发第4周开始同时给与CQ(50 mg/kg)鼻内注射2周,收集支气管肺泡灌洗液,进行嗜酸性粒细胞,中性粒细胞分析计数,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TGF-β、白细胞介素(IL)-4、IL-5含量,采用两样本t检验、单因素方差分析统计数据.结果 TGF-β可增强人支气管上皮细胞Collagen-Ⅰ、α-SMA及自噬标志物LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达,加用自噬抑制剂CQ后Collagen-Ⅰ、α-SMA表达均被到抑制HDM+CQ组嗜酸细胞数低于HDM组[(1.36±0.17)×105比(2.54±0.13)×105,t=13.275,P＜0.01];HDM+CQ 组中性粒细胞数低于 HDM 组[(0.45±0.06)×105比(0.59±0.08)×105,t=72.582,P＜0.05];HDM组TGF-β高于对照组[(16.82±1.35)ng/ml 比(5.90±1.03)ng/ml,t=11.234,P＜0.01];HDM+CQ 组 TGF-β 低于 HDM 组[(13.13±1.98)ng/ml 比(16.82±1.35)ng/ml,t=17.035,P＜0.05];HDM+CQ 组 IL-4 低于 HDM 组[(52.75±5.12)pg/ml比(61.13±4.57)pg/ml,t=10.790,P＜0.05].Western blot 检测肺组织匀浆中 Collagen-Ⅰ、α-SMA及LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达:HDM组Collagen-Ⅰ、α-SMA及LC3-Ⅱ的表达较对照组均明显增强,给与自噬抑制剂CQ后Collagen-Ⅰ、α-SMA的表达明显减弱.结论 自噬参与了过敏性哮喘的气道重塑,自噬抑制剂可减轻哮喘模型小鼠中气道炎性细胞的聚集及气道重塑因子的生成.