柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白重组枯草芽孢杆菌的构建与鉴定
Chinese Journal of Veterinary Science（2022）
摘要
旨在通过芽孢表面展示技术构建柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌,为防控鸡球虫感染提供新思路.首先从柔嫩艾美耳球虫和枯草芽孢杆菌基因组中分别扩增EtMIC2基因和芽孢衣壳蛋白编码基因CotB,通过重叠PCR技术将两者融合后克隆至pDG364中,构建整合型重组质粒pDG364-CotB-EtMIC2,并通过电转化将融合基因CotB-EtMIC2整合于枯草芽孢杆菌amyE基因位点,最后利用PCR、Western blot和免疫荧光等技术进行鉴定.结果显示,成功克隆目的基因EtMIC2,与锚定元件CotB融合成功,且定点整合于枯草芽孢杆菌基因组,融合蛋白正确表达并可在芽孢表面检测到特异性荧光信号.本研究成功构建能够表面展示EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌,可用于后续评估其抗球虫免疫保护效果.
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